哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的優(yōu)勢

1. 能實現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性；

2. 表達水平高；

3. 高效啟動子控制蛋白表達

4. 適合大規(guī)模蛋白表達。

艾伯森生物哺乳表達系統(tǒng)

艾伯森生物提供表達載體構(gòu)建、瞬時轉(zhuǎn)染、表達測試及大規(guī)模動物細胞發(fā)酵和蛋白純化等一站式蛋白技術(shù)服務(wù)。

表達載體：pcDNA 3.1，pIRES，pTT3，pCEP4，pATX1等常規(guī)載體以及我司分子技術(shù)人員自行合成與后期改造的性載體。

艾伯森生物哺乳表達系統(tǒng)服務(wù)內(nèi)容

1. 載體構(gòu)建及改進

 1) 可將cDNA克隆至客戶或艾伯森生物提供的哺乳細胞的表達載體中；

 2) 可在表達載體中添加分泌信號肽和純化標簽，促進蛋白分泌表達及滿足一步親和純化的需求；

 3) 能生產(chǎn)并鑒定高效穩(wěn)定細胞系，適合大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)。

2. 穩(wěn)定基因表達符合長期生存需求。整個實驗操作流程提供長期穩(wěn)定及規(guī)模可調(diào)的蛋白生產(chǎn)

3. 瞬時表達（TGE）

 1) 與穩(wěn)定基因表達相比，TGE主要適用于短期內(nèi)制備重組蛋白，一般在10天內(nèi)即可快速轉(zhuǎn)染，無需質(zhì)粒DNA的遺傳性選擇

 2) 艾柏森生物的瞬時表達使用懸浮細胞，能夠完成體積到100L的蛋白表達。

4. 工藝過程開發(fā)及擴大規(guī)模。艾柏森生物能夠優(yōu)化表達過程以及表達產(chǎn)物，檢測細胞表達量，摸索發(fā)酵罐發(fā)酵條件，適合大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)。

5. 純化。艾伯森生物擁有完整的蛋白純化系統(tǒng)，親和純化，凝膠過濾，離子交換及疏水層析等純化方法，能夠完成帶標簽與不帶標簽蛋白的純化，以及純化工藝的摸索。

服務(wù)流程

經(jīng)典案例

某生物細胞器基質(zhì)蛋白，全長334aa，大小37.03kDa，自帶Fc標簽蛋白，采用293F細胞表達。我們在對其編碼基因進行全密碼子優(yōu)化后，把它構(gòu)建到pTT3載體上，測序驗證無誤后，進行了30ml體積試表達，如Figure1：

Figure 1. Expression result .Coomassieblue staining.

MW. Molecular weight marker.Ø. Non-transfected (negative control).

目的蛋白的大回收率，我們先后對Flowthrough進行了兩次Protein G純化（Figure2~Figure3），可以看到在第二次純化后，F(xiàn)T中尚殘留的目的蛋白。

Figure2. Target protein purification profile.

Figure 3. Target proteinpurification profile.Reducing-PAGE analysis.

為此我們提高了鹽濃度至300mMNaCl，這次洗脫后，F(xiàn)T中剩余的蛋白量顯著降低，如Figure4.

Figure 5. Target protein purificationprofile. Coomassie blue staining.Reducing-PAGEanalysis.

再是表達摸索清楚成熟的實驗條件后，我們進入大體積制備，2L發(fā)酵。

Figure 6. Target protein purification profile and QC gel.